1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

　　2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

　　3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

　　4、甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

　　6、甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

　　8、取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

　　9、在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒操作注意事項

　　1、試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

　　2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

　　3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

　　4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

　　6、洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

　　7、底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

　　8、加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

　　9、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。