描述:新疆出血熱病毒(XHFV)PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶前來選購。
【產(chǎn)品名稱】新疆出血熱病毒(XHFV)PCR試劑盒
【包裝規(guī)格】 50T/盒
【產(chǎn)品方法】實時熒光PCR法
【預(yù)期用途】
適用于檢測,可用于臨床新疆出血熱病毒(XHFV)感染的輔助診斷,但不作確診使用。
新疆出血熱病毒(XHFV)PCR試劑盒【檢驗原理】
本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對新疆出血熱病毒(XHFV)特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,利用相應(yīng)儀器對PCR 過程進行實時監(jiān)測,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析,用于臨床上對可疑感染者的病原 學(xué)診斷。
【主要組成成份】
反應(yīng)液、酶液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【保存和運輸】上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸, 嚴禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提qu,請按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管 數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | RP反應(yīng)液 | 酶液 |
用量(樣本數(shù)為N) | 20μL | 1μL |
3.加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。
4.PCR 擴增(核酸擴增區(qū))
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL; 熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
2.結(jié)果分析判定
2.1 結(jié)果分析條件設(shè)定設(shè)置Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像 調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
2.2 結(jié)果判斷陽性:檢測通道Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線; 可疑:檢測通道 35值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
3.質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示; 陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
4.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
4.病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
5.不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
6.試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果;
7.本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完quan混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。
【相關(guān)產(chǎn)品】
ZK-D-0499豬鏈球菌(2型)檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
ZK-D-0500豬鏈球菌(通用型、2型)檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)
ZK-D-0501副豬嗜血桿菌檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
ZK-D-0502豬流感病毒(通用型)檢測試劑盒(實時熒光PCR法)
ZK-D-0503豬流感病毒H1N1亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)
ZK-D-0504豬流感病毒H1N2亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)