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          傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)PCR試劑盒

          描述:傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準(zhǔn)確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶前來選購。

          更新時(shí)間:2024-07-04
          產(chǎn)品型號:50T
          廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
          詳情介紹

          【產(chǎn)品名稱】傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)PCR試劑盒

          【包裝規(guī)格】 50T/盒

          【產(chǎn)品方法】實(shí)時(shí)熒光PCR法

          【預(yù)期用途】

          適用于檢測,可用于臨床傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)感染的輔助診斷,但不作確診使用。

          傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】

          本試劑盒采用TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計(jì)一對傳染性對蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,利用相應(yīng)儀器對PCR 過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測,實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析,用于臨床上對可疑感染者的病原 學(xué)診斷。

          【主要組成成份】

          反應(yīng)液、酶液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。

          【儲(chǔ)存條件及有效期】

          -20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個(gè)月。

          【適用儀器】
          ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

          【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸, 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

          【使用方法】 

          1 樣品處理(樣本處理區(qū))

          1.1樣本前處理 

          血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

          1.2 核酸提取

          推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提qu,請按照試劑說明書進(jìn)行操作。

          2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū)) 

          根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管 數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

          試劑

          RP反應(yīng)液

          酶液

          用量(樣本數(shù)為N)

          20μL

          1μL


          將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR 反應(yīng)管中,21μL/管。

          3.加樣(樣本處理區(qū)) 

          將步驟1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。

          4.PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

          4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

          4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL; 熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

          4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

          步驟

          循環(huán)數(shù)

          溫度

          時(shí)間

          收集熒光信號

          1

          1cycle

          95℃

          10min

          2

          40cycles

          94℃

          15sec

          55℃

          30sec

          2.結(jié)果分析判定

          2.1 結(jié)果分析條件設(shè)定設(shè)置Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像 調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

          2.2 結(jié)果判斷陽性:檢測通道Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線; 可疑:檢測通道 35值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

          3.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

           陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示; 陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

          4.檢測方法的局限性 

          1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

          2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

          3.陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

          4.病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          5.不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          6.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;
          7.本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

          【注意事項(xiàng)】

          1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

          2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完quan混勻并短暫離心;

          3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

          4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

          5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

          6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

          7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

          8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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