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          豬藍(lán)耳病病毒歐洲株P(guān)CR試劑盒

          描述:豬藍(lán)耳病病毒歐洲株P(guān)CR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準(zhǔn)確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶前來選購。

          更新時間:2024-07-04
          產(chǎn)品型號:50T
          廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
          詳情介紹

          【產(chǎn)品名稱】豬藍(lán)耳病病毒歐洲株P(guān)CR試劑盒

          【包裝規(guī)格】 50T/盒

          【產(chǎn)品方法】實時熒光PCR法

          【預(yù)期用途】

          適用于豬藍(lán)耳病病毒歐洲株檢測,可用于臨床豬藍(lán)耳病病毒歐洲株感染的輔助診斷,但不作確診使用。

          豬藍(lán)耳病病毒歐洲株P(guān)CR試劑盒【檢驗原理】

          豬藍(lán)耳病病毒歐洲株檢測試劑盒針對豬藍(lán)耳病病毒歐洲株的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含豬藍(lán)耳病病毒歐洲株基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

          【主要組成成份】

          RT-PCR反應(yīng)液、混合酶液、陽性對照、陰性對照。

          【儲存條件及有效期】

          避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期為12個月。

          【適用儀器】
          ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

          【檢驗方法】

          試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

          (1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

          (2)核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。

          n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

          單反液配制表(每份)

          PCR反應(yīng)液(UNG酶及Taq酶)

          20 μL

          (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

          (4)蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

          2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

          用QIAGEN、Roche公司DNA提qu試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

          3.加樣

          在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本DNA各5μl、終體積25μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

          PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

          反應(yīng)體積

          25 μL

          通道選擇

          FAM通道采集LSDV熒光信號

          PCR

          反應(yīng)

          條件

          步驟

          條件

          循環(huán)數(shù)

          UNG處理

          37℃:2分鐘(min)

          1

          預(yù)變性

          95℃:3分鐘(min)

          1

          PCR擴(kuò)增

          95℃:5秒(s)

          40

          58℃:40秒(s)

          (此階段結(jié)束時采集熒光信號)


          (1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

          (2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

          注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

          【參考值(參考范圍)】

          1.試劑盒有效性判定:

          (1)陽性對照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。

          (2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

          2.標(biāo)本結(jié)果判定:

          (1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

          (2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

          (3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

          【檢驗方法的局限性】

          當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的di檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。

          本試劑盒僅供標(biāo)本初步篩查使用,對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步使用培養(yǎng)法進(jìn)行確診。

          【注意事項】

          使用本試劑盒的實驗室,應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理規(guī)范進(jìn)行管理;

          為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理;

          各區(qū)域物品均為專用,不得交叉使用,以免污染;檢測結(jié)束后,應(yīng)立即對工作臺清潔;

          吸取反應(yīng)液時,應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡;上 PCR 儀前,應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確;

          試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心;

          試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放;

          為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記;

          檢測過程中使用過的吸頭,應(yīng)直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),檢測結(jié)束的PCR 反應(yīng)管,切忌開蓋,并與其他廢棄物品一同后丟棄;工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒;

          9.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用;并在有效期內(nèi)使用。

          【相關(guān)產(chǎn)品】

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